百奧賽圖/原創
Hi，各位讀者朋友下午好！每當大家帶著崇拜之情閱讀CNS文獻的時候，看到那些高（wu）端（yan）大（liu）氣（se）的圖片是不是感覺科研之魂在熊熊燃燒呢？而各種各樣的reporter鼠就是這些精美圖片中不可或缺的一環。今天小編給大家帶來的就是關於reporter鼠的科普知識。
所謂
reporter鼠
，就是敲入了報告基因（reporter gene）的鼠。常見的有
TdTomato鼠、mT/mG鼠、LacZ鼠、彩虹鼠
等，他們的重要作用是對各種特異性表達的Cre工具鼠進行驗證，簡而言之就是“工具鼠的工具鼠”：前面我們關於Cre-loxp系統的介紹中大家已經知道了帶有特異性表達的Cre工具鼠，然而如何去驗證這種鼠的特異性表達呢？前人們巧妙地設計了
reporter鼠來指示Cre鼠的特異性
。
B-tdTomato
cKI大鼠
TdTomato大鼠（SD-
Gt（ROSA26）tm1（CAG-LSL-Tdtomato）
/Bcgen）在ROSA位點敲入了一個CAG啟動子、TdTomato蛋白編碼序列和WPRE序列，並在CAG啟動子和TdTomato序列之間插入了LSL（loxp-3×stop-loxp）序列。如圖1所示。
圖1。 TdTomato的打靶策略［1］
這種鼠在正常情況下由於3×stop的存在並不能表達紅色熒光，當與Cre鼠或TAM啟用的CreERT2鼠交配後，產生的後代由於Cre重組酶切割loxp位點之間的序列將3×stop切除，TdTomato得到表達，就可以在Cre或CreERT2表達的組織中發出紅色熒光，指示基因的位置。圖2所示就是一種TdTomato cKI大鼠的實驗結果：
圖2。 TdTomato大鼠與大腦特異表達Cre大鼠交配後子代的組織熒光實驗［1］
圖片中紅色的部分就是鼠的大腦了，而那一抹醒目的紅色就是大鼠的海馬體啦，小夥伴們是不是覺得很酷炫呢？
mT/mG小鼠
mT/mG（ROSA-pCA-loxp-mT-pA-loxp-mG-pA）鼠的設計就更精妙了。這種鼠的組織被Cre重組前能夠在膜上發出紅色熒光，而被Cre重組後則在膜上發出綠色熒光。所以顧名思義，mT/mG的m意思就是membrane，T就是指TdTomato，而G含義是eGFP 。為了達到這種效果，在ROSA 位點敲入了pCA啟動子、一段mT和pA序列、一段mG和pA序列，在mT和pA序列兩端分別插入了 一段loxp位點，如圖3。
圖3。 mT/mG 小鼠的打靶策略［2］
這種鼠在正常情況下表達定位在膜上的TdTomato熒光蛋白，mT序列後面的pA訊號會將後面的序列轉錄過程強行終止。而經過Cre重組後mT+pA序列被切除，後面的mG蛋白得到表達。於是就得到了萬紅叢中一點綠的效果，如圖4。這種神奇特點賦予了它一種特殊的作用：工具鼠的工具鼠，即驗證各種特異性表達工具鼠的表達位置。
圖4。 Cre重組後的小鼠組織［2］
R26R (LacZ)小鼠
R26R鼠（ROSA-LSL-LacZ）是透過pROSA26-1載體構建的一種reporter鼠，插入了一段LSL序列和LacZ序列，如圖5A。這種鼠正常情況下並不表達LacZ，用LacZ的底物X-Gal對組織切片染色並不能顯色；而被Cre重組後，由於LSL序列被敲除，LacZ表達，在小鼠的組織切片中用X-Gal染色就會發生藍色的顯色反應，如圖5B。當然啦，由於LacZ鼠只能透過X-Gal顯色，所以僅適用於體外檢測。
圖5。 LacZ鼠打靶方案及體外檢測顯色［3］
R26R-Brainbow2.1小鼠
Brainbow小鼠
Gt（ROSA）26Sortm1（CAG-Brainbow2。1）Cle
），顧名思義就是彩虹一樣的小老鼠。這種鼠的設計方案與前面的reporter鼠相比又高了一個層次。
Brainbow鼠利用了3種不同的lox序列：lox2272、loxN和loxp。當遇到不同的Cre鼠切割的序列不同，能夠發出的熒光也就不同。打靶方式如圖6。
圖6。 Brainbow鼠的打靶策略［4］
是不是看著有點暈？其實道理還是很簡單的啦，每一段帶有發光集團的序列裡還有一小段pA訊號序列作為轉錄強制終止，只需要對應的Cre識別對應的lox位點就可以正確的發光啦，所以說幸福就是在對的時間遇到對的人。圖7就是一種Brainbow鼠的幸福：透過上面的四種熒光集團發出了10種不同的顏色來指示不同基因啟動子的表達位置。
圖7。 Brainbow鼠重組後的組織顯色［4］
好啦，今天的科普分享就到這裡啦，請大家多多關注百奧賽圖，我們會給大家帶來更多的科普知識，文獻解讀和優質模式動物，祝您科研順利！
參考文獻：
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