淵bn2021-12-29 20:30:58（二）操作步驟
方法一用於檢測未知抗原的雙抗體夾心法：
1。包被：用0。05M PH9。�碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0。1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩衝液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2。加樣：加一定稀釋的待檢樣品0。1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3。加酶標抗體：於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定後的稀釋度）0。1ml。37℃孵育0。5～1小時，洗滌。
4。加底物液顯色：於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0。1ml，37℃10～30分鐘。
5。終止反應：於各反應孔中加入2M硫酸0。05ml。
6。結果判定：可於白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O・D值：在ELISA檢測儀上，於450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔O・D值，若大於規定的陰性對照OD值的2。1倍，即為陽性。
