BioArt2020-05-09 09:26:57我們先來看一下PCR是什麼。
PCR是聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction）的簡稱。是一種分子生物學技術，用於擴增特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA複製。原理是利用DNA在體外95℃高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖（5‘-3’）的方向合成互補鏈。最有價值的應用領域就是對感染疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。
qPCR：
實現了DNA片段擴增後，如何進行
定量分析
呢？實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一種在DNA擴增反應中，以
熒光化學物質
測每次聚合酶鏈式反應（PCR）迴圈後產物總量的方法。用TaqMan探針法為例，將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合後，完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱迴圈，並遵守聚合酶鏈反應規律，與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷，熒光素遊離於反應體系中，在特定光激發下發出熒光，隨著迴圈次數的增加，被擴增的目的基因片段呈指數規律增長，透過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光訊號強度，求得Ct值，同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照，即可得出待測標本目的基因的複製數。
Real-time PCR：
Real-time PCR 與qPCR
基本相同，
是在PCR擴增過程中，透過熒光訊號，對PCR程序進行實時檢測。由於在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和該模板的起始複製數存線上性關係，所以成為定量的依據。
RT-PCR
逆轉錄PCR或者稱反轉錄PCR（reverse transcription-PCR， RT-PCR），是聚合酶鏈式反應（PCR）的一種廣泛應用的
變形，而不是Real-time PCR的縮寫
。在RT-PCR中，將 mRNA 反轉錄合成 cDNA 後再經 PCR 進行大量擴增，人們將這種偶聯稱為反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）。RT-PCR
實質上是對 mRNA 的擴增
，我們常利用此技術克隆 cDNA或分析某一特異基因在組織細胞中的表達情況。
